動物用藥品檢驗 3R原則之應用

 
提到動物實驗，大家可能會先想到，為了人類的科學、醫藥、各種產品，有大量的動物被用於實驗，最後大多會被犧牲。其實用於動物的藥品和疫苗，也可能以動物做原料及實驗，最後也一樣會犧牲動物。隨著科技進步、動保意識提高，動物實驗3R原則逐漸應用到各領域，本文將從「動物用藥品檢驗」做探討，也反映台灣推動3R的部分現況。

對於關心動物的朋友來說，認識這些實驗動物的真實處境，多少會有怵目驚心之感。但藉由你我的關注與傳達，有可能加強社會的共識與期盼，也有可能改善人們對待動物的方法，儘管這條路還很漫長，讓我們為動物繼續努力。


動物用藥基本認知
 
什麼是動物用藥品？包括下列各種原料藥、製劑及成藥。
1.專供預防、診斷、治療動物疾病之血清、預防劑、診斷劑及其他具有生物藥品效能之藥品。
2.專供預防、治療動物疾病之抗生素。
3.前二項以外，專供預防、治療動物疾病，促進或調節其生理機能之藥品。

動物用藥品由誰來檢驗？在行政院農委會的家畜衛生試驗所（簡稱畜衛所），是我國最高動物防疫科學機構，於1988年增設動物用藥品檢定分所（簡稱檢定分所），就是負責檢驗的執行單位，可以說是動物用藥品檢定的國家法定檢驗實驗室。

檢定分所在動物藥品檢驗過程中需以動物做實驗，同時也吸收新知、持續改進，應用動物實驗3R原則，並提供國家檢驗標準法規的修正建議。這些工作對動物有何影響、有何幫助？記者採訪了檢定分所長張家禎、生物藥品檢定研究系主任柯依廷，為讀者朋友們說明一二。


豬瘟疫苗要犧牲兔子？
豬瘟（Classical Swine Fever）是一種由病毒引起的高度傳染性疾病，由強毒株病毒引起之急性型豬瘟，感染率與死亡率均高達95%，世界動物衛生組織（OIE）將之列為應通報之動物傳染病之一，國內亦將之列為甲類動物傳染病。在台灣以施打疫苗的方式控制豬瘟，市面上可買到的豬瘟疫苗有3種。

1. 乾燥兔化豬瘟疫苗：以兔化豬瘟種毒注射於健康家兔，使其感染並出現高燒等症狀，持續4天後將其人道犧牲，採取脾臟及腸系膜淋巴結等臟器，加入保護劑以真空冷凍乾燥方法製成。一隻兔子大約可製作200多劑疫苗，一隻豬必須打2劑才會產生完整保護力。

2. 豬瘟組織培養活毒疫苗：細胞組織可在體外培養，不需在動物體內培養，提供營養液以增殖病毒，加入適當保護劑，經真空冷凍乾燥方法製成。其疫苗效率較為穩定，不會受到動物個體差異的影響。

3. 豬瘟E2次單位不活化疫苗：只取一段會引起免疫反應的蛋白質，加入適當佐劑製成疫苗，並非完整的病毒，製造過程中完全不會用到動物。

根據報導，自日據時代，台灣就出現豬瘟案例，1958年政府引進兔化豬瘟疫苗，有效降低豬隻死亡率。2016年，有動保團體控訴國內疫苗業者，為製作乾燥兔化豬瘟疫苗，過去18年共犧牲逾50萬隻活兔。

為減少犧牲活兔製造疫苗，農委會於2021年11月頒布修正「清除豬瘟暨口蹄疫所需疫苗之種類及其管理辦法」，自2022年1月1日起停止使用兔化豬瘟疫苗，養豬業者可選購豬瘟組織培養活毒疫苗、E2次單位不活化疫苗。


豬瘟疫苗的檢驗方法
除了疫苗的製作要犧牲動物，疫苗的檢驗也會使用動物，我國自1975年發布的「動物用藥品檢驗標準」，其中的「乾燥兔化豬瘟疫苗檢驗標準」及「乾燥兔化豬瘟組織培養活毒疫苗檢驗標準」至今經過6次修正（上次修正為2002年）。列舉了豬瘟疫苗檢驗的8條標準，其中「安全試驗」和「效力試驗」以豬作實驗，「認定試驗」和「病毒迷入試驗」以兔作實驗。

近年來由於動物福利意識抬頭、生技發展可取代部分動物實驗，國際間的檢驗規範也逐步改進。檢定分所於2020年著手修正「動物用藥品檢驗標準」中豬瘟疫苗相關章節，生物藥品檢定研究系主任柯依廷表示：「農委會已經預告豬瘟疫苗相關檢驗標準的修正草案，將於2022年上半年正式公告，包括在檢驗過程中減少動物使用量。」為此，檢定分所也在2021年辦4場實務操作訓練，讓廠商了解如何配合新法。

原本依照「豬瘟組織培養活毒疫苗」的安全試驗條文，需以皮下注射100劑量，這對豬會造成什麼影響？柯依廷說：「一隻豬正常來說只要打1劑量，只是我們的法規早期參考日本規範，以高標準來做試驗。試驗的豬要打的100劑量，可濃縮到5cc左右、分2個部位去打，只要打2針，不是100針。」一隻養大的豬通常有20-30kg，打進5cc劑量並不算多，通常不會有不良反應。

而在檢驗標準修正之後，每隻試驗的豬改為注射10劑量，這個劑量也是參考目前國際之間的作法。那麼在實驗之後呢？柯依廷表示，在分所內有許多豬用疫苗試驗都會用到豬，目前一年大約200～300隻豬，做完實驗後就會被犧牲，雖然農委會的「實驗動物照護及使用指引」中，有提到實驗動物再應用的指導原則，但在分所內最多再應用動物一次，就會犧牲動物，也就是將動物安樂死。


痛苦而死&人道終止
在「豬瘟組織培養活毒疫苗」的效力試驗中，原本規定：「對照豬須於二週內呈典型急性豬瘟病症而斃死」。而在2022年即將公告的修正條文，改為：「對照組須呈典型急性豬瘟病症。」最大差別就是，前者必須觀察至豬發病致死，後者可在確認發病後即採用人道終止。

柯依廷介紹，所謂對照組是指沒有施打待測疫苗（沒有免疫力）的豬，被打進豬瘟病毒而發病，以確認攻毒成功。症狀大約在7天內會出現，包括發燒、抽搐、精神不佳、無法站立、皮膚發紺（出現紫斑）等，過去的作法是讓豬發病到死亡，期間不能予以止痛、治療，最多會持續14天。

不過檢定分所自3年前就先採用人道終止的方式，不會等到豬發病痛苦而死，柯依廷說明：「當我們觀察到這些豬瘟發病的症狀，加上豬可能太虛弱，無法行走、無法飲食，符合人道終止的標準，就會請獸醫師進行安樂死。」先麻醉讓豬昏迷，再電擊讓豬死亡。

2022年等法規正式修改後，每個做試驗的場所、廠商都需遵守，也就是確認豬發病後即可人道終止。柯依廷說：「盡量不要讓動物承受太多痛苦，以此為原則。」


動物用藥品檢驗&動物實驗3R原則
 
2020年，農委會畜牧處推出「動物實驗3R計畫」，檢定分所提出的計畫「動物用藥品動物試驗3R模式開發及國家檢驗標準法規修正之評估」得到入選，當年度經費為700萬元。計畫全程將有4年，主要是檢討現行的檢驗標準，能否針對3R精神再做調整。2021年經費為576萬元，目標為：「預計計畫執行後，在執行國家動物用藥品檢定所使用的實驗動物量將可年減10-30%。」

計畫主持人為檢定分所長張家禎，他在受訪時表示：「我們在申請計畫5年前就開始準備了，這個工作我們之前就在做，未來也持續會做，只是剛好有計畫入選了，就有經費可以更新儀器、多做試驗、加快速度。」多年來，他們不只是做動物用藥品檢驗，也會檢視檢驗過程中有哪些部分可改善、國際間有哪些技術可學習。

張家禎表示：「檢驗標準相當多，我們會先選擇中大型的動物（例如牛、豬），或送驗批量很大的動物（例如家禽）做檢討。」然後尋找國際間是否有新文獻、新的檢驗方法，有了相關資料後，所內實驗室必須先做方法確認，接著就是對修訂方法所對應的現行許可證藥品進行測試。

「這是一個很大的工程，方法確認了、技術建立了，確認許可證有多少張、多少種，使用新方法也可行，各方面都合格後，才能作為檢驗方法修訂的依據。」張家禎說，檢定分所送出研擬之修正草案後，將由防檢局動物用藥品技術審議會來審查草案，是否符合學術及統計標準，最後才能通過。

「預計動物使用量年減10-30%，之所以把範圍寫得這麼大，是因為我們考慮到，如果改了方法之後，業者送檢無法通過，會造成糾紛，所以每個部分都要非常謹慎。」張家禎說明，動物用檢驗標準的修訂，除了參照國際相關技術，也要顧及業界可否適用，因此需要反復驗證方法，評估每張許可證過去的檢驗結果，都是標準修訂前重要的過程。


動物實驗3R原則之學習交流
對於動物實驗3R原則的發展，檢定分所平常就會蒐集資訊，張家禎介紹了幾個來源：「歐盟的歐洲藥典、美國的聯邦法規CFR（Code of Federal Regulations）、日本的動物用生物學製劑基準、韓國的獸藥國家檢驗標準，還有東協、OIE（世界動物衛生組織）的標準，都是我們主要參考的來源。」此外還有各動物製藥廠的品管技術資料，每當有新藥引進國內都需做委託試驗，檢定分所也會去了解其試驗設計與方法。

「我們也一直有跟國際上的團隊、廠商，進行技術交流。」近年來，菲律賓、越南、泰國、韓國、沙烏地阿拉伯等國家的檢驗人員都曾來訪台灣，而檢定分所的研究人員也曾到日本、韓國、泰國、澳洲、荷蘭等，拜訪該國的動物藥品檢驗、藥政管理單位，不只針對動物實驗3R原則，而是全面的學習新知、提升技術。

「我們所內的研究人員，都要上12小時的『實驗動物照護及使用』課程並取得證照，相關業務也要經過考核才能執行工作。」張家禎進一步說明，對於國內的動物藥品廠商，檢定分所每年會提供12小時的「藥品品質管理教育訓練」，其中包括3小時的IACUC課程，以強化動物福祉的觀念。

所謂IACUC就是實驗動物照護及使用委員會（Institutional Animal Care and Use Committee），依據《動物保護法》規定，進行動物科學應用之設施，應設置IACUC以督導該設施進行實驗動物之科學應用。IACUC作為科學專業與人道關懷的自我評估機制，以確保這些動物是被合理使用，並獲得妥善照護。


從動物實驗3R推進到4R
根據農委會的「2020年各動物科學應用機構監督報告統計分析」，全國進行動物科學應用機構的數量有199 家，以「試驗研究機構」數量最多（67家、33.7%），其次依序為「專科以上學校」、「醫院」、「動物用藥品廠」、「生物製劑製藥廠」、「藥物工廠」及「其他」，由此可見動物實驗的領域相當廣泛。

根據畜衛所網站的介紹影片，其目標包括：「強化實驗動物照護及使用委員會運作，落實實驗動物照護及使用管理，尊重動物生命，並兼顧試驗研究品質。」由本文採訪內容也可了解，檢定分所對於動物用藥之檢驗，確實是朝向動物實驗3R原則邁進，也持續修正「動物用藥品檢驗標準」，讓各廠商都必須使用新方法。

2020年，台灣使用了332萬多隻實驗動物，死亡率為90%，就現實而言，這些數字並非一朝一夕可改變。動物實驗3R原則（取代Replacement、減量Reduction、精緻化Refinement）是一個起步，需要各界的關心與監督，我們希望能在各領域有更多應用，並加入第4R（Responsibility負責），不僅要為實驗動物負責，也對社會大眾的期待、觀感負起責任，持續修法並落實執法。



 

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